所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

目前購買熒光定量PCR儀，一般包括：實時熒光定量PCR儀+開機檢測試劑+通用電腦+自動分析軟件。

儀器的性能需要考量：線性范圍、檢測靈敏度、檢測度、反應時間、檢測通道數(shù)、檢測樣本量等。

而一臺實時熒光定量PCR儀的硬件配置主要看：溫控模塊、光路檢測模塊。

1、溫度控制模塊

溫度控制是qPCR技術(shù)的核心所在，為了實現(xiàn)高準確度，實時PCR熱系統(tǒng)必須確保整個加熱塊的溫度均勻性，確保能夠以相同速率的反應處理所有的樣本。

（1）溫控速率

升降溫速度快的是好設備，但是單一模塊升降溫速度快并不代表樣本升降溫速度也快，所以還要看樣本的升降溫速度是否也快，注意大升降溫速度≠平均升降溫速度。

（2）溫控精度

控溫模塊中銀質(zhì)半導體控溫模塊目前是比較好的，因為銀是金屬中銀的導熱性能較高，升降溫速度快，孔間溫度均一性好，邊緣效應相應減少。

金屬的熱傳導系數(shù)表：銀 ＞ 銅＞金＞ 鋁＞ 鐵＞ 錫＞ 鉛 。

溫度準確度和溫度均一性越小越好。

普通的Peltier加熱方式具有明顯邊緣效應，均一性差，是上一代的模塊PCR加熱技術(shù)，正處于被淘汰的邊緣，但是成本相對會。

2、光學檢測模塊

（1）光源

光強比較：光強比較：髙強度白光LED ＞ 鹵鎢燈 ＞單色LED

白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右，單色LED的10倍左右，能夠捕捉到多的熒光信號，是專業(yè)光源領域的新技術(shù)代表。

壽命比較：壽命比較：髙強度白光LED = 單色LED ＞鹵鎢燈

白光LED的壽命長達10000小時以上，一般可以使用5-10年左右，基本上超過了一般科研儀器的正常工作壽命，基本終身無需換光源，而鹵鎢燈光源基本每2年就要換一次，費時費力，南方是不足一年就要換一次。

（2）檢測器

熒光定量PCR靈敏度：冷CCD＞CCD＞光電倍增管 CPM ＞光電二管

CCD作為熒光信號的接受器，其質(zhì)量直接決定了儀器的檢測靈敏度和穩(wěn)定性。10℃的冷CCD，和常溫CCD有著質(zhì)的區(qū)別，在專業(yè)光學領域，冷CCD的造價成本至少要比常規(guī)CCD高出一倍以上。冷CCD在低的溫度下進行光信號捕捉，能夠提供高的光感靈敏度和低背景噪音。因此，有的熒光定量PCR能夠穩(wěn)定區(qū)分1000和2000拷貝的濃度差異，而有的只能做到區(qū)分5000和10000個拷貝數(shù)。

（3）光路傳導

光路設計應盡可能有效消除邊緣效應，光路設計是否有效消除孔間邊緣效應，可以自行進行實驗檢驗。

除上訴兩個硬件配置外，現(xiàn)有的熒光定量PCT儀均搭配有控制系統(tǒng)，可與PC連接，或者內(nèi)置觸控屏，同時會配有分析軟件功能，越簡單越好。

3、性能

（1）溫度控制模塊

采用銀質(zhì)半導體溫控模塊和多點溫控技術(shù)，溫度準確度±0.1℃、溫度均一性±0.1℃，確保實驗度，大升降溫度速度12℃/s，半小時可完成擴增反應。

（2）光學檢測模塊

光源采用免維護白光LED燈，光源強度大；高靈敏度光電傳感器，檢測靈敏度比CCD探測器高10倍，無孔間的邊緣干擾影響；光路傳導采用側(cè)底部采光，每個反應孔都擁有光纖傳輸，使用佳濾光片組合，無孔間檢測干擾。