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            豬場非洲豬瘟病毒檢測樣本采樣方法
          
      
          
      
            發(fā)布時間：2019-11-13 閱讀：428次 
          
      
		  
      
            
		  
      
          
      
                監(jiān)測是防控動物疫病的基礎(chǔ)，是制定防控建設(shè)的一級依據(jù)。當(dāng)前非洲豬瘟疫情嚴(yán)峻，通過進(jìn)行豬場環(huán)境的監(jiān)測，可以及時發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟疫情隱患，有效切斷病原傳播途徑，為非洲豬瘟防控決策提供科學(xué)依據(jù)。
      
    非洲豬瘟病毒，具有龐大而復(fù)雜的基因組，擁有的體外生存能力，雖然宿主單一，只感染豬和野豬，但傳播源和傳播途徑都十分復(fù)雜。因為非洲豬瘟病毒的這些特點，導(dǎo)致非洲豬瘟的防控工作實施難度大。
      
    能否在感染之前，及時地把非洲豬瘟病毒“揪”出來，是能否有效避免非洲豬瘟病毒侵害的關(guān)鍵之一。在復(fù)產(chǎn)方面，豬場能否成功，清場后是否做到凈化非洲豬瘟病毒，必須通過的環(huán)境監(jiān)測來驗證。
      
    2019年4月，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布《關(guān)于加強養(yǎng)殖環(huán)節(jié)非洲豬瘟疫情排查的通知》，鼓勵規(guī)模豬場和種豬場開展非洲豬瘟自檢，熒光定量PCR檢測是可以替代病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速的ASFV檢測技術(shù)，被認(rèn)為是ASFV核酸檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，被用在OIE所有的區(qū)域性參考實驗室。不少規(guī)模豬場開始自我配備相應(yīng)設(shè)備開始自檢，但很多人對如何有效采集檢測樣本比較疑惑，今天小編為大家簡單介紹一下：
      
    1、血液采樣
      
    使用含有抗凝血劑(EDTA)的無菌管(真空采血管)從頸靜脈、下腔靜脈或耳靜脈抽取全血。如果動物已經(jīng)死亡，可以從心臟中采血，但必須立即進(jìn)行。避免使用肝素(綠色蓋子)，因為其可以抑制PCR反應(yīng)(造成假陰性)，和/或由于紅細(xì)胞吸附試驗(HAD)造成假陽性的產(chǎn)生。但采集血液要求豬場技術(shù)人員能熟練操作，否則易造成豬流血污染，導(dǎo)致病毒擴(kuò)散，所以不建議豬場頻繁采血檢測；
      
    2、唾液采樣
      
    在正常生產(chǎn)情況下，病毒可能在1~2個月前就出現(xiàn)在唾液中了。因此，與血液檢測相比，通過唾液檢測，能夠較早地發(fā)現(xiàn)豬只是否感染了病毒。不僅如此，豬只感染ASFV后，先出現(xiàn)在口腔中，時間可能長達(dá)2~3個月?！翱谇粌?nèi)局部感染階段是非洲豬瘟窗口期檢測的重要時機，此時尚未形成病毒血癥，積采取措施能有效防控病毒爆發(fā)及擴(kuò)散。唾液采集要求：
      
    （1）采集的唾液樣本要求清亮、透明并不得含有食物殘渣，故采樣之前的停食至關(guān)重要，原則上要求停食 12 小時以上；
      
    （2）唾液中含有豐富的具備活性的酶。機體健康狀態(tài)不同，酶的含量也千差萬別，從而導(dǎo)致唾液中的病原體半衰期長短不一，對于非洲豬瘟病毒來說，長者 2～3 天，短者 1～2 小時不等。病原半衰期的存在是導(dǎo)致唾液學(xué)非洲豬瘟病毒漏檢率稍高的重要因素之一。因此采集完唾液要及時冰凍保存，并在三小時內(nèi)完成檢測。
      
    3、環(huán)境、人員采樣
      
    對于未發(fā)病豬場，及時了解生產(chǎn)生活區(qū)、周邊環(huán)境、裝豬臺、盤豬場等地區(qū)消毒是否徹底，有沒受到非洲豬瘟威脅？豬場換養(yǎng)豬工人，管理人員進(jìn)出豬場，是否帶毒？豬場想要復(fù)養(yǎng)，但豬欄內(nèi)非洲豬瘟病毒情況如何？因此豬場環(huán)境、人員采樣檢測顯得尤為重要。
      
    （1）采樣工具準(zhǔn)備：在采樣管內(nèi)添加1ml無菌生理鹽水，準(zhǔn)備無菌棉簽；
      
    （2）豬場環(huán)境采樣：將無菌棉簽在豬場環(huán)境表面進(jìn)行擦拭，放入生理鹽水中洗脫待檢。
      
    （3）人員采樣：將無菌棉簽潤濕生理鹽水后在身體表面耳朵、頭發(fā)、鼻孔、手指等進(jìn)行擦拭；
      
    環(huán)境樣本推薦使用商品化的核酸提取試劑盒提取樣本DNA進(jìn)行PCR檢測。按照提取試劑盒說明書操作步驟提取。
      

      
	
      

      

      
	
      

      

      
	
      

      

      
	
      

      

      
	
      

      

      
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